猫咪弓形虫如何检测?
猫的弓形虫病诊断一般根据临床症状、流行病学资料和实验诊断的结果综合判断, 实验诊断包括病原体分离鉴定、血清学检查、细胞培养检查、组织病理学检查和分子生物学方法等,其中以病毒分离鉴定作为确诊的金标准。由于弓形虫生活史的特殊性,只能采用体外培养的方法进行检测;另外,由于人和动物体内存在大量类卵圆体,因此实验诊断时很难区分是弓形虫还是类卵圆体所致感染[5]。对实验诊断有意义的其它相关的血液学和生化学的检查也包括在常规检验项目中。 目前,临床上常用的实验诊断方法主要参照《兽医传染病学》进行, 具体方法如下:
1.直接镜检取眼屎、尿、唾液或脑脊液加以涂片,瑞氏染色后,在光镜下查找弓形虫幼虫。
2.血清学检查(1)沉淀法:取待检血清(小鼠血清用10%乳剂稀释)与抗原(弓形虫滋养体粗提液)按一定比例混合, 置37℃温育30min,然后加人磷酸盐缓冲液(PBS),置冰箱中4℃过夜。次日,离心弃去上清液,加入4倍体积的新洁尔灭溶液,混匀后静置片刻,再离心除去新洁尔灭溶液,最后加人0.01mol/L PBS至原血清含量,调零后,以此为起始浓度,按比色法定量。在波长560nm处测各管吸光度值,以确定被检血清中抗体的存在和含量。(2)间接血凝(IHA)试验:吸取已制备好的不同稀释度的兔抗血清,加到已包被好弓形虫糖蛋白抗原的96孔板上,置37℃温育30min后,洗板,然后按每孔加人20%蛋黄液100μl,孵育2h后,洗板,按每孔加人1:4000碘化钾乙醇溶液100μl,放置30min后,于492nm处测定各孔的吸收度(A)值。
3.病原检查采取病料(脑、心、肝、肺、肠等器官)进行涂片或制片,瑞氏染色后,在光镜下有虫体形态改变的细胞内感染证据即可诊断为弓形虫病。